案例分享——安曼5L反应器培养CHO细胞表达一种融

 工程案例     |      2019-09-24 10:05
CHO细胞是被广泛应用于重组蛋白、抗体等表达的哺乳动物细胞系。CHO细胞的无血清培养有利于产品的下游纯化、减少血清的外源病毒污染等潜在风险。
安曼生物反应器采用完全清洁不锈钢设计,提供全自动CIP/SIP,五种搅拌桨能全方位满足不同细胞的生长,控制系统基于ISA88设计,更加安全精确稳定,提供个性化需求定制的生物反应器,全面满足客户从小试、中试到规模化生产全方位需求,下面结合AM-5L生物反应器无血清纯悬浮培养CHO细胞的培养效果进行介绍。
一、培养背景
反应器:A&M 5L生物反应器
表达产物:一种融合蛋白,胞外分泌
细胞株:CHO/dhrf细胞悬浮培养株
培养基:HyQ SFM4CHO
摇瓶产量:200-300ug/ml左右,扩大体积培养后蛋白产量下降
二、培养条件
细胞生长期DO:50%
细胞生长期pH :7.2
细胞生长期T:37℃
细胞表达期T:34℃
转速度:60rpm
收获体积:3L
细胞培养期:共6天
细胞表达期:共4天
三、培养过程
培养过程:准备种子细胞0.8×106cells/ml,活率95%,1000ml打入生物反应器内,留少许样品检菌,设置好参数,启动自动控制状态,每天根据细胞密度、残糖量、渗透压补加培养基、浓缩液和碱,细胞状态良好,如下:

表达过程:细胞密度和体积到达要求后,降温转表达。
四、培养数据:

细胞耗糖曲线:


细胞活率曲线:

蛋白表达量:

五、结果分析
1、细胞培养过程中每天取样,观察细胞状态,检测残糖及渗透压,计数及活率,补加培养基和浓缩液,细胞增殖正常,活率正常。
2、蛋白表达伴随整个细胞生长过程,当活率低于80%时收获下罐,以免其他代谢杂质增多不利于后期蛋白分离纯化。
3、培养结果表明,在安曼5L生物反应器上扩大培养后,工艺参数控制精确稳定,细胞密度和表达量显著提高。